实时定量PCR仪的用途

实时定量ＰＣＲ仪的用途

实时定量ＰＣＲ仪主要用于检测特定基因在待测样品中出现的次数，以高分辨率的变性梯度凝胶电泳ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ，对ＰＣＲ产物进行测序的聚合酶链反应产物分析方法。

实时定量ＰＣＲ仪的使用方法

实时定量ＰＣＲ仪的使用方法如下：

１．　开机预热：仪器接通电源，屏幕显示“Ｓｔａｒｔ”键，按“Ｅｎｔｅｒ”键开机，进入待机状态。开机后仪器需预热３０分钟，期间“Ｓｔａｒｔ”键可直接开机，预热完成后自动进入主界面。

２．　操作主界面：开机后仪器进入主界面，主界面显示仪器的运行状态、时间、灯开关状态、校准序列和用户登录界面。用户可通过点击“主菜单”进入ＰＣＲ仪的工作菜单。

３．　开盖放光：在待机界面按“扩展”键，选择“放光”进入放光模式。此时ＰＣＲ仪的光室会打开，同时背景灯光熄灭，仪器会自动去除光室内的残留荧光。

４．　校准序列：在待机界面按“扩展”键，选择“校准序列”进入校准序列模式。在ＰＣＲ仪工作前，**须进行校准序列。校准序列是仪器根据ＰＣＲ反应体系体积和反应体系中荧光染料的浓度计算出的一个校准系数。校准序列可以由用户自定义，用户可以在“校准序列模板”中选择相应的模板，也可以自定义新的模板。

５．　用户登录：在开机界面按“扩展”键，选择“用户登录”进入用户登录模式。在ＰＣＲ仪开机状态下进行用户登录，登录信息为开机密码。

６．　手动ＰＣＲ：在主界面按“扩展”键，选择“ＰＣＲ”进入ＰＣＲ模式。ＰＣＲ模式分为一步法和多步法。

７．　板次预设置：在ＰＣＲ仪工作菜单中点击“板次预设置”，然后根据实际情况设置。用户可对板次进行设置和保存，保存的内容只对本次仪器重启后的使用有效。在保存板次时需输入正确的开机密码。

８．　用户退出：在主界面按“取消”键，退出ＰＣＲ仪的操作模式。

实时定量ＰＣＲ仪的注意事项

在使用实时定量ＰＣＲ仪时，有几个注意事项：

１．　实验操作人员**须熟悉所用ＰＣＲ仪的基本原理、性能状态以及操作步骤等，并严格按照说明书操作。

２．　在ＰＣＲ仪开启之前，要确保所有反应体系都已置于ＰＣＲ仪腔体内，并关闭ＰＣＲ仪门。

３．　开始ＰＣＲ反应之前，应设置好ＰＣＲ仪的相关参数，如循环参数、温度等。

４．　在ＰＣＲ反应运行过程中，应避免非特异性扩增，因此需要设计特异性引物。

５．　荧光定量ＰＣＲ的实验结果易受不同仪器、不同试剂和不同操作者的影响，因此应建立标准化体系，以获得更好的实验效果。

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